Кислотоустойчивые бактерии по Цилю Нильсену: метод окраски

Несмотря на свое название, кислотоустойчивые бактерии предпочитают расти в нейтральной среде. Их устойчивость к изменению кислотности внешней среды обусловлена ​​особой структурой клеточной стенки и составом клеточного содержимого.

Окраска таких бактерий с карболовым фуксином в красный цвет очень стойкая — в результате кислотостойкие микроорганизмы не меняют цвет после обработки их раствором серной кислоты.

Что делать в такой ситуации? Для начала рекомендуем. В этой статье подробно описаны методы борьбы с паразитами. Также рекомендуем обратиться к специалисту.

Кислотоустойчивые бактерии становятся красными, некислотные бактерии становятся синими

В эту группу входят различные таксоны: микобактерии, актиномицеты, азотфиксирующие бактерии. Таксономия выделяет их в отдельную межвидовую группу. Споры ряда бактерий также отличаются повышенной устойчивостью к кислотам — покоящиеся формы, окруженные плотной оболочкой и обладающие большей устойчивостью к неблагоприятным условиям окружающей среды. Процесс образования спор занимает у бактериальной колонии 18-20 часов, и они просыпаются, когда благоприятные условия наступают через 4-5 часов.

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Окрашивание

интересно, что термин кислотоустойчивые бактерии применяется к микроорганизмам не с точки зрения экологических характеристик, а в том смысле, что они окрашивают согласно Цилю-Нильсену и не меняют цвет после окрашивания растворами слабой кислоты и этанолом. Эти методы позволяют успешно обнаруживать кислотоустойчивые формы в мазках. Однако были обнаружены такие характеристики этих бактерий, как устойчивость к высоким концентрациям кислот и щелочей в среде.

Кислотостойкие формы бактерий считаются грамположительными, потому что таксономия этих организмов основана на толщине их стенок, что демонстрируется окрашиванием по Граму.

Стандартные методы окрашивания (например, окраска по Граму) не дают удовлетворительных результатов. Кислотные бактерии натощак окрашивают по Граму только при использовании высоких концентраций красителей или высоких температур. Такие кислотоустойчивые бактериальные препараты могут храниться долгое время.

Для выявления кислотоустойчивых бактерий в мазке используются следующие препараты:

  1. Генциановый фиолетовый, 1.
  2. Раствор Люголя, содержащий кристаллический йод и йодид калия.
  3. 96% этиловый спирт%.
  4. Фуксин Пфайффер (фуксин Цил смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1: 9).

Окрашивание производится после закрепления стандартных препаратов на пламени. После этого накладывается фильтровальная бумага, смоченная фуксином Циля, и стекло нагревается над пламенем 5 минут, не давая жидкости закипеть. Препарат не должен пересыхать. После завершения фиксации его промывают большим количеством воды под низким давлением.

Читайте также:  Хламидиоз у мужчин: симптомы, схема и курс лечения препаратами, возможные последствия

После высыхания мазка его обрабатывают слабыми растворами серной или соляной кислоты и снова промывают водой. Заключительный этап — окрашивание метиленовым синим (красителем Леффлера).

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Краска Циля-Нильсена — один из методов выявления возбудителей туберкулеза и проказы. Таксономия классифицирует их как грамположительные организмы.

Кислотоустойчивость и строение клетки

Чаще всего кислотоустойчивые бактерии микробиологически описываются между микобактериями и актиномицетами. Это связано с особенностью строения их клеточной стенки, которая содержит миколовые кислоты, небольшое количество липидов, теиновые кислоты, полисахариды и полипептиды, а также воск. Используя методы определения устойчивости к кислотам, микробиологи многое узнали о структуре бактериальных спор и клеточной стенки.

обнаружено сходство клеточных стенок кислотоустойчивых бактерий и спор бактерий, что определяет их свойства.

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Разновидности

Разработаны методы определения кислотостойкости патогенных микроорганизмов — возбудителей туберкулеза и лепры. Однако постепенно среди кислотоустойчивых бактерий были обнаружены сапрофитные формы со сходными свойствами клеточной стенки. У них есть ряд отличий (быстрый рост в культуре, более быстрое или, наоборот, медленное обесцвечивание этанола), но для их обнаружения используются одни и те же методы.

Подобная структура клеточной стенки наблюдается у большинства актиномицетов. Эти малоизученные микроорганизмы всегда присутствуют в париетальной микрофлоре человека и животных. Когда иммунная система хозяина ослаблена, они могут вызвать туберкулезные состояния.

Эти организмы способны перерабатывать сложные среды, содержащие парафин, воск, смолу или керосин, с образованием витамина B12, биотина, рибофлавина, пантотеновой кислоты.

Интерес к актиномицетам привел к тому, что методы обнаружения бактерий с характерной клеточной стенкой стали использовать не только для изучения патогенных и сапрофитных бактерий у человека и животных.

Таким образом, среди азотфиксирующих организмов были обнаружены Beijerinckia, обладающие высокой устойчивостью в средах с различной кислотностью. Он показал хорошую устойчивость к кислотам у некоторых азотфиксирующих Clostridia (Clostridium). Изотопные исследования выявили формы азотфиксации среди актиномицетов).

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Способы окраски бактерий

Простой метод окраски

Препарат помещают на подставку для окрашивания исследуемым материалом вверх. На нее пипеткой наносится раствор красителя. По истечении указанного времени краситель осторожно сливается, препарат промывается водой и просушивается фильтровальной бумагой. В простом методе используется один краситель. Метиленовый синий и щелочно-синий окрашивают препарат в течение 3-5 минут, фуксин Пфайффера — 1-2 минуты.

Каплю иммерсионного масла наносят на окрашенный препарат, сушат и подвергают микроскопу с использованием иммерсионной системы.

Читайте также:  Желтая малярия (лихорадка): симптомы, кто возбудитель, методы лечения

Сложные методы окраски

Окраска по Граму (универсальный метод). Самый распространенный метод дифференциального окрашивания — окраска по Граму.

В зависимости от результатов окрашивания все микроорганизмы делятся на две группы: грамположительные и грамотрицательные.

Грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке магниевую соль РНК, которая образует комплексное соединение с йодом и основным красителем (горечавка, метил или кристаллический фиолетовый). Этот комплекс не разрушается под действием алкоголя, и бактерии сохраняют пурпурный цвет.

Грамотрицательные бактерии не могут удерживать основной краситель, поскольку они не содержат РНК-соли магния. Под воздействием спирта краситель смывается, клетки обесцвечиваются и окрашиваются дополнительным красителем (фуксином) в красный цвет.

  1. На препарат прикладывают бумажку по Синеву и наносят несколько капель воды или раствора генцианвиолета. Окрашивать 1-2 минуты. Снимите бумагу или выбросьте краситель.
  2. Не смывая водой, нанести раствор Люголя до почернения (1 мин), затем выбросить краситель.
  3. Не смывая водой, нанести 96% спирт до удаления красителя (30-60 с). Можно замочить препарат в стакане спирта на 1-2 секунды.
  4. Препарат промывают водой.
  5. Их окрашивают фуксином Пфайффера в течение 3 минут, промывают водой и сушат.

Микроскопическое исследование с помощью иммерсионной системы.

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Окрашивание по Цилю — Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). Этот метод используется для обнаружения бактерий туберкулеза и лепры, которые имеют большое количество липидов, воска и гидроксикислот в клеточной мембране. Бактерии устойчивы к воздействию кислот, щелочей и спирта. Для увеличения проницаемости клеточной стенки первый этап окрашивания проводят при нагревании.

  1. Фиксированный препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят фуксин Циля. Удерживая пинцетом стакан, препарат нагревают над пламенем плиты до выхода паров. Добавляют новую порцию красителя и нагревают еще 2 раза. После остывания снимите бумагу и промойте препарат водой.
  2. Обесцвечивают препарат 5% -ным раствором серной кислоты, 2-3 раза окунув его в раствор или выливая кислотой стекло, после чего несколько раз промывают водой.
  3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-5 минут, промывают водой и сушат.

Микроскопическое исследование с помощью иммерсионной системы.

Бактерии кислотного голодания становятся красными, остальные — синими.

Окраска по Ожешко (выявление спор).

  1. На высушенный на воздухе мазок наливают несколько капель 0,5% раствора соляной кислоты и нагревают до образования пара. Препарат сушат и фиксируют на пламени.
  2. Окрашено по методу Циля-Нильсена. Споры натощак становятся розово-красными, а бактериальная клетка — синей.
Читайте также:  Уреаплазма специес у мужчин и женщин, какие симптомы заражения и методы лечения

Окраска Бурри-Хинса (обнаружение капсулы). Этот метод называется отрицательным, так как фон препарата и бактериальная клетка окрашиваются, а капсула остается неокрашенной.

  1. На слайд наносится капля черных чернил, разведенных в 10 раз. В него вносится капля культуры. Краем точильного круга берется пятно, как пятно крови, и сушится.
  2. Химически фиксируется спиртом или хлоридом ртути. Тщательно промыть водой.
  3. Окрашивается фуксином Pfeiffer в течение 3-5 минут. Осторожно промойте и высушите на воздухе.

Внимание! Не используйте фильтровальную бумагу, чтобы не повредить препарат.

Микроскопическое исследование с помощью иммерсионной системы. Фон препарата черный, клетки красные, капсулы не окрашены.

Прижизненная окраска микроорганизмов

Для исследования живой культуры часто используют метиленовый синий и другие красители в больших разведениях (1: 10000). Каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с каплей красителя и закрывают покровным стеклом. Микроскопически с объективом 40x×.

Кислотостойкие бактерии Ziehl Nielsen: метод окрашивания

Изучение подвижности микроорганизмов

Для исследований используют культуру бактерий, выращенных на жидкой питательной среде, или суспензию бактерий в изотоническом растворе хлорида натрия.

Метод измельченной капли. Каплю культуры наносят на предметное стекло и закрывают покровным стеклом. Чтобы избежать образования пузырьков воздуха, покровное стекло подводят к краю капли и резко опускают. Чтобы препарат не засыхал, его помещают во влажную камеру.

Мокрая камера представляет собой чашку Петри с влажной фильтровальной бумагой на дне. На бумагу кладут две спички и на них кладут заготовку. Чашка закрывается крышкой.

Микроскоп с 40-кратным увеличением объектива в темном поле).

Подвесной метод падения. Для приготовления препарата понадобится стакан с отверстием, покровное стекло и вазелин. Края ямки покрывают тонким слоем вазелина.

На покровное стекло наносят каплю культуры. Затем аккуратно накройте покровное стекло стеклом с отверстием так, чтобы капля оказалась в центре. Склеенные слайды быстро переворачиваются вместе с покровным стеклом. Капля находится в герметичной камере и сохраняется длительное время. В микроскопии сначала при малом увеличении (8 ×) обнаруживается край капли, затем образец исследуется при большом увеличении.

Победить паразитов можно!

— Надежное и безопасное избавление от паразитов за 21 день!

  • Он выводит из организма продукты жизнедеятельности паразитов.
  • Эффективно уничтожает большинство видов гельминтов за 21 день.
  • Абсолютно безопасно;
  • Защищает печень, сердце, легкие, желудок, кожу от паразитов;
  • В состав входят только натуральные компоненты;
  • Не вызывает побочных эффектов;

Теперь действует программа льготной бесплатной упаковки. Читать .

Ссылка на основную публикацию